📋 实验流程
全流程一览，产品可直接加购1
模板与引物准备
20 min准备 DNA 模板（基因组 DNA/质粒/cDNA），设计并合成上下游引物。
💡 技巧 引物设计时 GC 含量控制在 40–60%，避免发夹结构和二聚体。
⚠️ 注意 模板浓度过高会抑制反应，一般 10–100 ng 为宜。
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
2
配制反应体系
15 min在冰上配制 PCR 反应体系：缓冲液、dNTP、引物、模板、DNA 聚合酶、水。
💡 技巧 配制 Master Mix（先混公共组分再分装）可减少加样误差。
⚠️ 注意 全程冰上操作，最后加入 DNA 聚合酶，避免酶失活。
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
3
PCR 扩增（循环反应）
1.5 h设定程序：95°C 变性 30s → 55–65°C 退火 30s → 72°C 延伸，循环 30–35 次。
💡 技巧 退火温度通常 = 引物 Tm − 5°C，条带不特异时先优化退火温度。
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
4
电泳检测
40 min取 5 µL 产物跑琼脂糖凝胶电泳，用 DNA Marker 对照，紫外观察条带。
💡 技巧 加 loading buffer 后再上样，便于沉降和观察。
⚠️ 注意 EB/核酸染料有毒性，戴手套操作并妥善处理废液。
🧪 这一步需要的耗材（点「去选购」到产品页选规格/品牌）
⚠️ 新手常犯的 4 个错误（避坑指南）
- ① 忘了加引物或模板：反应体系缺关键组分，扩增不出来。
- ② 退火温度不对：太高扩不出、太低非特异条带多。
- ③ 污染：气溶胶污染导致假阳性，务必分区操作、换枪头。
- ④ 循环数过多：30–35 次足够，过多会导致非特异扩增和错配。
❓ 常见问题（做坏了怎么办）
+没有条带怎么办？
排查：① 引物/模板缺失 ② 酶失活 ③ 退火温度过高 ④ 模板降解。
+出现非特异条带怎么办？
提高退火温度、减少循环数、优化引物特异性。
+条带很淡怎么办？
增加模板量、增加循环数、或提高聚合酶量。